Lẹ́yìn ọjọ́ mẹ́ẹ̀ẹ́dọ́gbọ̀n tí wọ́n ti lo ìgbóná ara ní 28°C, laccase láti *Pleurotus ostreatus* NRC620 fi iṣẹ́ tó ga jùlọ hàn nínú ohun èlò ìṣẹ̀dá fún olu. Iye pH àti ìwọ̀n otútù tó dára jùlọ fún enzyme yìí jẹ́ 3.0 àti 70°C, lẹ́sẹẹsẹ. Lẹ́yìn wákàtí méjì tí wọ́n ti lo ìgbóná ara ní 40°C àti 50°C, iṣẹ́ enzyme náà dúró ní 68.33% àti 59.61% lẹ́sẹẹsẹ. Lẹ́yìn wákàtí méjì tí wọ́n ti lo ìgbóná ara ní citrate-phosphate buffer (pH 7.0), iṣẹ́ enzyme náà dúró ní 100%. Àfikún 10 mM MgSO₄ àti CuSO₄ mú kí iṣẹ́ enzyme náà pọ̀ sí i ní nǹkan bí 21% àti 35%, lẹ́sẹẹsẹ, nígbà tí NaCl, MnCl₂, KCl, àti CaCl₂ dín iṣẹ́ enzyme náà kù. Nípa lílo ABTS gẹ́gẹ́ bí ohun èlò ìṣàpẹẹrẹ, àwọn pàrámítà kinetic (Km àti Vmax) ti *Pleurotus ostreatus* NRC 620 laccase jẹ́ 1.99 mM àti 16,217 μmol min−1 L−1, lẹ́sẹẹsẹ. Ìtọ́jú enzymatic ti àwọn àpẹẹrẹ omi apple dín pH àti viscosity kù gidigidi, ìdínkù yìí sì ní ìbáṣepọ̀ pẹ̀lú àfikún àkókò ìfipamọ́. Ìtọ́jú Laccase yọrí sí ìdínkù díẹ̀ nínú gbogbo akoonu phenolic ti omi apple, ṣùgbọ́n a kò rí ìdínkù nínú iṣẹ́ antioxidant.
Ní àwọn ọdún àìpẹ́ yìí, àwọn olùwádìí ti dojúkọ lílo ìmọ̀-ẹ̀rọ aláwọ̀ ewé ní ilé iṣẹ́ oúnjẹ. Laccase jẹ́ ọ̀kan lára àwọn enzymu tó wúlò jùlọ nínú ilé iṣẹ́ oúnjẹ, ó ń rí àwọn ohun èlò bíi ṣíṣe oje, yíyan, dídádúró wáìnì, àti mímú àwọn ànímọ́ organoleptic ti àwọn ọjà oúnjẹ sunwọ̀n síi.1Ọpọlọpọ awọn eweko giga ati awọn microorganisms n jade laccose,2àti àwọn fungus bíi deuteromycetes, ascomycetes, àti basidiomycetes tún lè mú laccase jáde.3Laccase (EC 1.10.3.2) jẹ́ oxidase aláwọ̀ búlúù tí ó ń dín atẹ́gùn mọ́lẹ́kúlù kù sí omi nípa lílo ètò kan tí ó ní àwọn átọ̀mù bàbà mẹ́ta tí ó yàtọ̀ síra, nípa bẹ́ẹ̀ ó ń mú kí onírúurú èròjà phenolic àti àwọn amine aromatic máa ṣiṣẹ́. Nígbà tí a bá ń ṣe àwọn oje èso àti ewébẹ̀, ìpara enzymatic àti nonenzymematic jẹ́ àwọn ọ̀ràn pàtàkì.4Níwọ́n ìgbà tí àwọn èròjà wọ̀nyí ní ipa búburú lórí àwọ̀, adùn, àti òórùn omi náà, a gbọ́dọ̀ yọ wọ́n kúrò.5
Nínú gbogbo èso, ápù ni wọ́n ń jẹ jùlọ ní gbogbo àgbáyé àti ní European Union. Ní ọdún 2019, ìṣẹ̀dá ápù wà ní ipò kẹta ní àgbáyé, ó ju mílíọ̀nù mẹ́tàdínlọ́gọ́rin (87 million tons) lọ.6Àwọn ápù ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn èròjà phenolic, títí bí flavonoids àti phenolic acids bíi caffeic acid àti chlorogenic acid.7Nítorí pé a sábà máa ń jẹ omi ápù ní ìrísí rẹ̀ tó ṣe kedere, nǹkan bí 50% sí 90% àwọn èròjà phenolic ni a máa ń pàdánù nígbà tí a bá ń ṣe àtúnṣe rẹ̀.8Lónìí, àwọn oníbàárà sábà máa ń yan àwọn ọjà tí a kò tíì ṣe iṣẹ́ wọn dáadáa, bíi omi ápù oníkùukùu pẹ̀lú ìwọ̀n polyphenol tó pọ̀. Síbẹ̀síbẹ̀, nítorí pé ó ní ìwọ̀n phenolic tó pọ̀, irú omi ápù yìí lè yípadà àwọ̀ rẹ̀ kí ó sì ṣókùnkùn.9Onírúurú ìmọ̀ ẹ̀rọ, títí kan àwọn ọ̀nà ìtọ́jú ooru bíi pasteurization ní 60–90°C, ni a lò láti dín tàbí dènà òkùnkùn omi ápù kù.10Sibẹsibẹ, ni ibamu si iwadi nipasẹ Sauceda-Gálvez11, ìṣiṣẹ́ ooru le pa awọn kemikali iyipada run ki o si ni ipa lori awọn agbara organoleptic ti omi apple. Awọn yiyan si awọn ọna iṣiṣẹ ooru pẹlu supercritical carbon dioxide, ultraviolet radiation, ultrasound, high hydrostatic pressure, tabi high-pressure homogenization.12Lílo àwọn ìmọ̀ ẹ̀rọ wọ̀nyí dáadáa àti bí wọ́n ṣe ń mú omi èso tó yẹ jáde sinmi lórí àwọn ohun tí wọ́n lò àti àwọn ànímọ́ ọjà náà. Lílo wọn níbi gbogbo ní ààlà nítorí owó tí wọ́n ń ná, àwọn ipa búburú lórí dídára àwọn oúnjẹ kan, tàbí àìṣiṣẹ́ enzyme tó péye.13,14
A le lo Laccase lati mu omi eso duro ati lati ṣe alaye.15Gökmen àti àwọn ẹlòmíràn16dámọ̀ràn lílo laccase fún àlàyé omi èso nítorí pé ó ń mú àwọn èròjà phenolic kúrò dáadáa nípa yíyípadà wọn sí àwọn polymers tàbí oligomers tí a lè mú kúrò ní lílo gbogbo àwọ̀ ultrafiltration, èyí tí ó ń jẹ́ kí omi ápù máa wà ní ìdúróṣinṣin àti kedere fún ọ̀sẹ̀ mẹ́fà ní 50°C. A fi laccase *Trichoderma* tí a ti sọ di mímọ́ pamọ́ sórí àwọn ìlẹ̀kẹ̀ alumina, a sì lò ó láti mú àwọn èròjà tí kò ní adùn tí ó ń fa ìbàjẹ́ microbes ti omi ápù jáde.17
Nǹkan bí 80-90% àwọn èròjà tó ń yí padà nínú omi ápù ni esters àti aldehydes, èyí tó ń fún omi náà ní òórùn àrà ọ̀tọ̀.18A fi okùn àdánidá láti inú ìkarahun àgbọn kékeré ṣe Laccase láti inú *Trametes versicolor* tí ó dúró lórí ìtìlẹ́yìn olowo poku tí a fi okùn àdánidá ṣe láti inú àwọn ìkarahun àgbọn kékeré fún ìmọ́tótó omi ápù.19Àwọn ìwádìí tí a ti ṣe tẹ́lẹ̀ ti ṣe ìwádìí lórí bí omi ápù ṣe ń dúró (àwọ̀ àti ìdọ̀tí) nípa lílo àwọn ọ̀nà tí kò ní enzyme tàbí àwọn ọ̀nà tí kò ní ìdènà, tàbí pẹ̀lú ultrafiltration.5,19Sibẹsibẹ, ipa ti awọn laccase olu lori awọn agbara ti oje apple lakoko ipamọ ko tii han gbangba. Nitorinaa, ero iwadi yii ni lati ṣe iwadii awọn iyipada ninu awọn agbara ti oje apple, akoonu ti oje phenolic, ati iṣẹ antioxidant ti oje apple lẹhin itọju pẹlu awọn laccase olu ati ibi ipamọ ti o wa ni firiji fun ọsẹ meji. Awọn laccase ni agbara lati ṣe oxidize awọn agbo phenolic, eyiti o jẹ ki wọn ni ileri fun lilo ni ọpọlọpọ awọn ilana ile-iṣẹ, pẹlu ṣiṣe alaye oje. Iwadi yii ṣe ayẹwo awọn laccase lati *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ni idojukọ lori awọn ipo ti o dara julọ fun iṣẹ wọn ati imunadoko wọn ninu ṣiṣe alaye oje. Lakoko ti iwadii lori awọn olu oyster (P. ostreatus NRC 620) tun ni opin, awọn iwadi iṣaaju ti ṣe ayẹwo awọn enzymu lati oriṣiriṣi awọn orisun olu, gẹgẹbi Trametes versicolor ati Ganoderma lucidum. Ero iwadi yii ni lati ṣe ayẹwo lilo ti o ṣeeṣe ti enzyme yii ninu ile-iṣẹ ounjẹ ati lati ṣe afihan awọn ohun-ini alailẹgbẹ rẹ, paapaa pH ati iwọn otutu ti o dara julọ.
A ra 2,2′-Azooxybis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid) (ABTS) láti ọ̀dọ̀ Sigma-Aldrich (Canada). Gbogbo àwọn ohun èlò mìíràn jẹ́ ti ìpele àyẹ̀wò.
Ile-iṣẹ Gbigba Àṣà Àìlera Oníroro ti Ile-iṣẹ Iwadi Orilẹ-ede gba iru olu oyster ti a mọ si NRC620. Lẹhin irugbin kekere, a tọju iru yii sori awọn slants potato dextrose agar ni 4°C. Ọna igbaradi inoculum ni atẹle yii: a fi mycelium ti o dagba ni ọjọ mẹwa, ti o dagba ni kikun sinu awọn awo agar potato dextrose agar ki o si fi sii ni 28°C. Lẹhin ọjọ mẹwa, a yọ awọn bulọọki mycelium mẹta ti o ni iwọn ila opin 12mm kuro ninu agar media nipa lilo punch irin ti ko ni ailabawọn a si fi sinu awọn igo Erlenmeyer 250-mL pẹlu awọn plug owu ti o ni 50 mL ti alabọde asa ti a ti sọ di ailabawọn (pH 5.0, gẹgẹ bi Othman et al ti ṣalaye tẹlẹ.20) Wọ́n fi àwọn àṣà náà sínú iná ní 28°C fún ọjọ́ 18. Lẹ́yìn náà, wọ́n fi ìwé àlẹ̀mọ́ Whatman No. 1 sẹ́ àwọn àṣà náà, àti pé ohun tí ó yọrí sí i ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí orísun enzyme.
A pinnu iṣẹ́ Laccase nípa lílo ABTS gẹ́gẹ́ bí ohun èlò ìṣàpẹẹrẹ. Àdàpọ̀ ìṣesí náà (2 mL) ní 500 μL ti 0.3 mM ABTS (tí a yọ́ nínú 0.1 M sodium citrate buffer, pH 4.5) àti iye tí a nílò fún àpẹẹrẹ enzyme tí a fi omi tí a ti pò mọ́.21,22Ní ríronú pé laccase lè mú kí ABTS bàjẹ́ ní iwọ̀n otútù yàrá (28 °C ± 2), a pinnu ìfàsẹ́yìn ABTS nípa wíwọ̀n ìbísí nínú ìfàsẹ́yìn ní 420 nm (ε)420= 36,000 cm-1 M -1) nípa lílo Agilent Carry-100 UV spectrophotometer. A nílò ìwọ̀n kan ti iṣẹ́ laccase láti ṣe oxidize 1 μmol ABTS fún ìṣẹ́jú kan. A pinnu ìṣọ̀kan amuaradagba nípasẹ̀ ọ̀nà Bradford nípa lílo bovine serum albumin gẹ́gẹ́ bí ìṣàkóso inú.23,24
Lẹ́yìn tí wọ́n ti gba enzyme láti inú irú oyster mushroom NRC 620, wọ́n wọn iṣẹ́ rẹ̀ ní àwọn àkókò ìdàgbàsókè ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ fún ọjọ́ mẹ́ẹ̀ẹ́dọ́gbọ̀n lábẹ́ àwọn ipò tí kò dúró ní 28°C.
Láti ṣe àyẹ̀wò ipa tí ìgbóná ara ń ní lórí ìṣiṣẹ́ laccase, a ṣe àwọn àyẹ̀wò ní ìwọ̀n ìgbóná ara láti 20 sí 90 °C. Kí a tó fi enzyme náà kún un kí a sì bẹ̀rẹ̀ ìhùwàpadà náà, a da buffer (0.1 M sodium citrate, pH 4.5) àti substrate (ABTS) pọ̀, a sì fi sínú rẹ̀ fún ìṣẹ́jú 5 ní onírúurú ìgbóná ara. A ṣe àyẹ̀wò ìdúróṣinṣin ooru enzyme nípa fífi sínú 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) ní 40, 50, 60, àti 70 °C fún wákàtí 2, lẹ́sẹẹsẹ. Lẹ́yìn náà, a ṣe àyẹ̀wò ìṣiṣẹ́ tí ó ṣẹ́kù nípa lílo substrate ABTS.
A ṣe àyẹ̀wò ipa pH lórí ìṣiṣẹ́ laccase nípa lílo ABTS gẹ́gẹ́ bí substrate nínú àwọn ohun èlò citrate-phosphate 0.1 M pẹ̀lú ìwọ̀n pH 2.5 sí 7.0. A fi omi enzyme náà sínú 40°C fún wákàtí méjì nínú 0.1 M citrate àti Tris buffers (pH 3, 4, 6, àti 7) láti ṣe àyẹ̀wò ìdúróṣinṣin pH. A ṣírò ìṣiṣẹ́ tó kù pẹ̀lú ABTS gẹ́gẹ́ bí substrate lẹ́yìn ìbímọ.
A fi laccase naa sinu apo sodium phosphate buffer (0.05 M, pH 7.0) ti o ni orisirisi awọn ion irin (Mg2+, Cu2+, Co2+, Ca2+, Zn2+, K+, Na+, ati Mn2+) ni awọn ifọkansi ti 2.5 mM ati 10 mM, lẹsẹsẹ. Lẹhinna a fi substrate (ABTS) kun lati bẹrẹ iṣe naa, a si ṣe ayẹwo iṣẹ ibatan naa.
A wọn ìfàsẹ́yìn ABTS nípasẹ̀ laccase ní onírúurú ìfọ́pọ̀ (0.025–3 mM) ní pH 4.5 láti pinnu àwọn pàrámítà kinetic (Vmax àti Km).àwọn ohun tí kò dúró ṣinṣinA ṣírò ìṣirò ìṣirò Michaelis-Menten nípa lílo àwòrán Lineweaver-Burk, èyí tí ó ṣe àfihàn ìwọ̀n ìṣesí gẹ́gẹ́ bí iṣẹ́ ìfojúsùn substrate. A ṣírò àwọn constants kinetic láti inú àwòrán Lineweaver-Burk nípa lílo software GraphPad Prism version 6.01.
Lẹ́yìn tí wọ́n ti fi omi ẹ̀rọ fọ àwọn ápù náà dáadáa, wọ́n gé wọn sí méjì, wọ́n sì fi omi ẹ̀rọ Braun MP80 apple juicer (tí wọ́n ṣe ní Germany) lọ̀ wọ́n. Wọ́n fi cheesecloth ṣe àlẹ̀mọ́ omi náà. Wọn kò fi enzyme kún ẹgbẹ́ ìṣàkóso náà, nígbà tí wọ́n fi 2.0% laccase (tí wọ́n dán wò jùlọ) kún omi ápù tí wọ́n ṣẹ̀ṣẹ̀ sè, èyí tí wọ́n sì tọ́jú sí i ní 4°C fún ọ̀sẹ̀ méjì.
A pinnu acidity ti a le fi titratable (TA) ati pH gẹgẹbi ọna ti Boulton etal.27A fi mita pH oni-nọmba (JENWAY 3510 pH meter) wọn pH ti ayẹwo kọọkan. A ṣe iṣiro acidity ti a le lo lati inu malic acid nipa lilo agbekalẹ atẹle yii.
Níbi tí V àti C jẹ́ ìwọ̀n (mL) àti ìfọ́pọ̀ (0.1 mol/L) ti omi sodium hydroxide tí a lò nínú titration, lẹ́sẹẹsẹ. K ni iye ìyípadà malic acid, tí ó dọ́gba pẹ̀lú 0.067, àti W ni ìwọ̀n (g) ti omi ápù.
Àpapọ̀ àwọn ohun líle tí ó lè yọ́ (TDS) iye gbogbo awọn ayẹwo omi ni a pinnu nipa lilo ohun elo PAL-1 apo refractometer (ATAGO, Tokyo, Japan). Lẹhin wiwọn kọọkan, a fi omi ti a ti yọ kuro ninu lẹnsi opitika fọ lẹnsi opitika, a si ṣe idanwo ayẹwo omi eso apple kọọkan ni igba mẹta. A ṣe iṣiro iye fun ayẹwo kọọkan nipa ṣiṣe iṣiro awọn wiwọn mẹta naa. A ṣe iṣiro apapọ ± iyatọ boṣewa fun ayẹwo omi apple kọọkan nipa ṣiṣe iṣiro awọn abajade wọnyi.
A ṣe àyẹ̀wò bí àwọn àyẹ̀wò omi ápù ṣe rí tó nípa lílo ohun èlò ìyípo (RV, Rheotest 2, Germany). A gbé àyẹ̀wò náà sínú sílíńdà “S2″ ti viscometer. Ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn tí ó hàn gbangba ni a fi hàn nípasẹ̀ ìtẹ̀sí ti ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn sí ìpele ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn, èyí tí a ṣírò láti inú ìfàsẹ́yìn ìfàsẹ́yìn àti àwọn ìtẹ̀sí tí ó báramu ní onírúurú ìwọ̀n ìfàsẹ́yìn (láti 1.00 sí 437.4 s⁻¹). Àgbékalẹ̀ fún ṣíṣírò ìfàsẹ́yìn tí ó hàn gbangba ni báyìí:
Níbi tí η jẹ́ ìfọ́síkí tí ó hàn gbangba (cP), τ ni ìdààmú ìfọ́síkí (dyn/cm²), γ ni ìwọ̀n ìfọ́síkí (sec⁻¹), àti (τ) ni a ṣírò nípa lílo àwọn ìwọ̀n ìfọ́síkí (α) àti sílíńdà (Z) nípa lílo àgbékalẹ̀ wọ̀nyí: τ = Z . α.
A pinnu atọka browning gẹgẹbi ọna ti Meidav etal.29A fi omi oje milimita 10 sinu centrifuge ni 2750 xg fun iṣẹju mẹwa. A da omi oje ti o kun fun 5 milimita ti ethanol 95%. A wọn gbigba ti adalu naa ni 420 nm nipa lilo Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC).
A pinnu iye phenolic lapapọ (TPC) nipa lilo Folin-Ciocalteu reagent gẹgẹ bi Boulton et al. ṣe ṣalaye.[27]A ṣe ìwọ̀n ìyípo gallic acid fún ìfọ́pọ̀ láti 0 sí 500 mg/L (r²= 0.997). Àwọn àbájáde ni a fi hàn gẹ́gẹ́ bí àwọn ohun tí ó jọ gallic acid (mg GAE/mL).
Fi omi gbigbẹ 125 μL ati omi FRAP 2850 μL kun 25 μL ti omi apple ki o si fi adalu naa sinu okunkun fun30min. Lẹ́yìn náà, wọ́n ìfàmọ́ra ní 593 nm nípa lílo Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC). A ṣe àtúnṣe FRAP reagent nípa dída 300 mM acetate buffer (pH 3.6), 20 mM iron(III) chloride, àti 10 mM 2,4,6-tris(2-pyridyl)triazine (TPTZ) (tí ó yọ́ nínú 40 mM HCl) ní ìpíndọ́gba 10:1:1. A ṣe ìtẹ̀sí boṣewa kan nípa lílo Trolox gẹ́gẹ́ bí ìwọ̀n (R²= 0.999), a sì fi àwọn àbájáde náà hàn gẹ́gẹ́ bí μM Trolox/mL.
A pinnu ipa antioxidant ti awọn oje ti a ti tọ́jú ati ti a ko tọju nipa lilo ọna DPPH lati ṣe ayẹwo agbara wọn lati yọ awọn radicals ọfẹ DPPH kuro.31A da omi oje mikrolita mẹwa pọ mọ 1 milimita ti omi DPPH (100 μM) ninu methanol. Lẹhin iṣedaṣe ni okunkun fun iṣẹju 30, a wọn gbigba ti adalu naa ni 517 nm nipa lilo Shimadzu UV spectrophotometer (UV-1601 PC). Awọn abajade naa ni a fihan bi awọn deede trolox (μM trolox/ml) ti o da lori ila iwọntunwọnsi (R2= 0.990).
Àwọn ìwádìí tí a rí fihàn pé a rí ìṣẹ̀dá laccase tó pọ̀ jùlọ nínú NRC 620 oyster olu ní ìparí ọjọ́ kejìdínlógún ti ìwúkàrà, tí ó dé ìṣiṣẹ́ 1302 U/L. Èyí ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bí ìpìlẹ̀ fún pípinnu àkókò ìgbẹ̀ tí ó dára jùlọ fún ìṣẹ̀dá laccase (Àwòrán 1). Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìṣẹ̀dá enzyme pọ̀ sí i pẹ̀lú àkókò ìgbẹ̀ tí ó pọ̀ sí i, ìwọ̀n ìbísí náà kò bá àkókò ìgbẹ̀ mu tààrà; lẹ́yìn ọjọ́ 21, ìṣiṣẹ́ enzyme ti pọ̀ sí i ní 90 U/L nìkan (sí 1390 U/L). Nítorí náà, a yan ọjọ́ 18 gẹ́gẹ́ bí àkókò ìgbẹ̀ tí ó dára jùlọ láti ṣe ìwọ́ntúnwọ́nsí èso ọjà pẹ̀lú àwọn àǹfààní ọrọ̀ ajé ti àkókò ìgbẹ̀ tí ó pọ̀ sí i.
Àkókò ìgbìn lórí ìwúwo laccase nínú Pleurotus ostreatus NRC 620. A fi àwọn bulọọki mycelial fungus mẹ́ta (12 mm) sínú 50 milimita ti ohun èlò tí a ti sọ di aláìlera, lẹ́yìn náà a gbìn wọ́n ní 28 °C fún ìgbà ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀.
Gẹ́gẹ́ bí àwọn ìwádìí mìíràn, àwọn àbájáde wa fihàn pé àkókò àṣà tó dára jùlọ láti ṣe àṣeyọrí ìtújáde laccase láti ọwọ́ olu ṣeéṣe kí ó wà láàrín ọjọ́ méje sí mẹ́rìndínlógójì.32Gẹ́gẹ́ bí Ezike àti àwọn ẹlòmíràn ti sọ.33, *Trametes polyzona* WRF03 ṣe iye laccase ti o ga julọ ni opin ọjọ kẹsan ti ìwúkàrà, pẹlu iṣẹ kan pato ti 1637 U/mg amuaradagba. Pẹlupẹlu, Othman et al.34rí i pé *Trichoderma harzianum* S7113 tú ọ̀pọ̀lọpọ̀ laccase jáde ní ọjọ́ karùn-ún ti ìbílẹ̀. Ìwọ̀n ìṣẹ̀dá laccase dé ògógóró ní ọjọ́ kẹrìnlá, lẹ́yìn náà ó dínkù díẹ̀díẹ̀.34Bó tilẹ̀ jẹ́ pé ìtújáde enzyme náà lè wáyé ní àkókò ìdàgbàsókè pàtàkì, ó sábà máa ń ga jùlọ ní àkókò àárín, ó sì máa ń jẹ́ kí ó wáyé nítorí lílo orísun erogba tàbí nitrogen.34,35
Bó tilẹ̀ jẹ́ pé laccase láti Pleurotus ostreatus NRC 620 fi ìṣiṣẹ́ gíga hàn lórí ìwọ̀n otútù gbígbòòrò láti 50°C sí 80°C, tí ó sún mọ́ ìṣiṣẹ́ gíga jùlọ (69–98%), a rí ìṣiṣẹ́ rẹ̀ tí ó pọ̀ jùlọ ní 70°C (Àwòrán 2a). Níta ìwọ̀n otútù yìí, ìṣiṣẹ́ enzyme dínkù ní nǹkan bí 70°C. Àwọn àbájáde wọ̀nyí fihàn pé enzyme náà ń ṣiṣẹ́ ní ìwọ̀n otútù gíga, ó ṣeé ṣe kí ó jẹ́ nítorí pé ìwọ̀n otútù gíga ń mú kí agbára ìṣiṣẹ́ náà pọ̀ sí i.
Ipa ti iwọn otutu iṣe (a) ati pH (b) lori iṣẹ laccase ninu *Pleurotus ostreatus* NRC 620. Awọn iwọn otutu ti o wa lati 20 si 90 °C ni a ṣe aṣeyọri nipa fifi adalu naa sinu awọn iwọn otutu oriṣiriṣi fun iṣẹju 5 ṣaaju ki o to fi enzymu kun ati bẹrẹ iṣe naa. A ṣe ayẹwo ipa ti pH lori iṣẹ laccase nipa lilo ABTS gẹgẹbi substrate ninu awọn ojutu ti o ni 0.1 M citrate-phosphate buffer lori ibiti pH ti 2.5 si 7.0.
Gẹ́gẹ́ bí Ezike et ti sọal.33, iwọn otutu to dara julọ fun *Trametes polyzona* WRF03 laccase jẹ 55 °C, eyiti o jẹ kanna bi ti *Ganoderma lucidum*laccase36àti irú bí iwọ̀n otútù tó dára jùlọ (50 °C) fún *Trametes polyzona* KU-RNW02737àpò ìpamọ́ . Baldrian38ṣe àkíyèsí pé, ní ti àwọn ètò enzyme mìíràn tí ń ba lignin jẹ́, ìwọ̀n otútù tí ó dára jùlọ fún laccase wà láàrín 50 sí 70 °C.
Àwọn àbájáde náà fihàn pé enzyme náà fi iṣẹ́ tó ga jùlọ hàn ní pH 3.0, ó dé 94% ìṣiṣẹ́ ní pH 3.5. Síbẹ̀síbẹ̀, ó ń ṣiṣẹ́ lórí ìwọ̀n pH tó gbòòrò láti 2.5 sí 7.0 (Àwòrán 2b). Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ó fi iṣẹ́ tó ga hàn ní àwọn ipò acidic ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn ipò diẹ́ẹ́rẹ́ tàbí alkaline. Iṣẹ́ rẹ̀ dúró ní o kere ju 77% lórí ìwọ̀n pH láti 2.5 sí 4.5, ṣùgbọ́n ó dé ìwọ̀n 38% ní pH 7.0. pH tó dára jùlọ fún laccase láti *Trametes polyzona* WRF03 jẹ́ 4.533, èyí tó jẹ́ dọ́gba pẹ̀lú pH fún àwọn laccase láti *Trametes polyzona* KU-RNW02737, *Trichoderma harzanium* 39, *Pleurotus* sp. 40, àti *Trametes hirsuta* 41. Síbẹ̀síbẹ̀, gẹ́gẹ́ bí ìwádìí láti ọwọ́ Chairin et al.42, pH to dara julọ fun laccase lati *Polymorpha f. sp.* WR710-1 jẹ 2.2, lakoko ti pH to dara julọ fun laccase lati *Polymorpha f. sp.* IBL-04 jẹ 5.043. Isopọ awọn anions hydroxide (inhibitor laccase) si awọn atomu idẹ ti laccase T2/T3 le jẹ idi fun idinku iṣẹ laccase labẹ awọn ipo pH alaileto tabi alkaline. Eyi le da gbigbe elekitironi inu lati aarin T1 si aarin T2/T3 duro, nitorinaaidiwọniṣẹ́ enzyme23,44
Nípa fífi enzyme náà sínú ihò ní àwọn iwọn otutu tó yàtọ̀ síra, a rí i pé àkókò ìfàsẹ́yìn àti ìwọ̀n otútù ní ipa lórí ìdúróṣinṣin enzyme náà. Lóòótọ́, laccase láti *Trametes polyzona* NRC 620 fi ìdúróṣinṣin tó ga hàn ní 40℃ àti 50℃, ó sì pa 68.33% àti 59.61% ìṣiṣẹ́ àkọ́kọ́ rẹ̀ mọ́, lẹ́sẹẹsẹ, lẹ́yìn ìṣẹ́jú 120 (Àwòrán 3a). Ní ìyàtọ̀ sí èyí, lábẹ́ àwọn ipò kan náà (40℃ àti 50℃, ìṣẹ́jú 120), laccase láti *Trametes polyzona* WRF03 pa 64.38% àti 42.92% ìṣiṣẹ́ rẹ̀ mọ́, lẹ́sẹẹsẹ.33Ní ìyàtọ̀ sí èyí, bí àkókò ìbímọ àti ìwọ̀n otútù ṣe ń pọ̀ sí i dín ìdúróṣinṣin *Trametes polyzona* NRC 620 laccase kù; Lẹ́yìn ìbímọ ní 60℃ àti 70℃ fún ìṣẹ́jú 60, ìṣiṣẹ́ rẹ̀ dínkù sí 39.24% àti 1.72%, ní ìtẹ̀léra (Àwòrán 3a). Gẹ́gẹ́ bí àwọn àbájáde ìwádìí náà, laccase láti *Trametes polyzona* WRF03 fi ìdúróṣinṣin gíga hàn ní 40 àti 50℃ jálẹ̀ ilana ìtọ́jú ooru.33Bákan náà, Lueangjaroenkit etal.37àti Chairin àtial.42ròyìn ìdúróṣinṣin àwọn laccase láti Trametes polyzona KURNW027 àti Trametes polyzona WR710-1 ní 50 °C fún wákàtí kan, lẹ́sẹẹsẹ. Gẹ́gẹ́ bí biocatalyst tó wúlò tó wúlò ní onírúurú ẹ̀ka ìmọ̀-ẹ̀rọ, laccase yẹ kí ó ní ìdúróṣinṣin àti iṣẹ́ tó dára lórí ìwọ̀n otútù tó gbòòrò.
Iduroṣinṣin thermostatic (a) ati iduroṣinṣin pH (b) ti laccase lati inu *Pleurotus ostreatus* NRC 620. A ṣe ayẹwo iduroṣinṣin thermostatic nipa fifi ojutu enzyme sinu 0.05 M sodium phosphate buffer (pH 7.0) ni 40, 50, 60, ati 70 °C fun wakati meji, lẹsẹsẹ. A ṣe ayẹwo iduroṣinṣin pH nipa fifi ojutu enzyme sinu 0.1 M citrate buffer ati Tris buffer (pH 3, 4, 6, ati 7) ni 40 °C fun wakati meji. A ṣe iṣiro iṣẹ-ṣiṣe ti o ku nipa lilo ABTS gẹgẹbi substrate lẹhin incubation.
Láti mọ àwọn ipò tó dára jùlọ fún lílo àti ìpamọ́ enzyme, a ṣe ìwádìí nípa ipa pH lórí ìdúróṣinṣin laccase. Fífi ara hàn sí àwọn iye pH tó yàtọ̀ síra nípa lórí ìdúróṣinṣin ìṣètò amuaradagba, èyí sì ní ipa lórí ìdúróṣinṣin àti ìṣiṣẹ́ molecule enzyme náà. Àwọn àbájáde náà fihàn pé enzyme náà kò dúró ṣinṣin lábẹ́ àwọn ipò acid, nígbàtí ó fi ìdúróṣinṣin tó dára hàn ní àwọn iye pH tó ga (àwọn agbègbè didoju àti alkaline). Ní àwọn iye pH ti 7.0, 6.0, 4.0, àti 3.0, àwọn ìwọ̀n ìdúró enzyme lẹ́yìn ìṣẹ́jú 120 jẹ́ nǹkan bí 100%, 62.54%, 52.39%, àti 11.14%, ní ìtẹ̀léra (Àwòrán 3b). *Strombus multisus* WRF03 laccase fi ìdúróṣinṣin tó ga hàn ní àwọn iye pH didoju (5.5–6.5) àti ìdúróṣinṣin tó kéré sí ní àwọn iye pH acid (ní ìsàlẹ̀ 4.0). Lẹ́yìn ìṣẹ́jú 120 ní iye pH ti 5.5, 6.0, àti 6.5, ìwọ̀n ìdúró enzyme jẹ́ nǹkan bí 82%, 100%, àti 93%, ní ìtẹ̀léra.33Khairin àti àwọn ẹlòmíràn42ṣe akiyesi pe laccase lati Trametes polyzona WR710-1 duro ṣinṣin ni iwọn pH ti 6.0 si 7.0, lakoko ti Sayed et al.45fihàn pé laccase dúró ṣinṣin díẹ̀ lábẹ́ àwọn ipò pH aláìlágbára. Síbẹ̀síbẹ̀, laccase láti Cerrena unicolor tún fi ìdúróṣinṣin hàn lábẹ́ àwọn ipò alkaline (pH 9.0)46Àwọn laccase tí a ṣe ìwádìí rẹ̀ fi ìdúróṣinṣin gíga hàn lórí ìwọ̀n pH tó gbòòrò. Èyí lè jẹ́ ànímọ́ pàtàkì fún àwọn ohun èlò ilé-iṣẹ́.
Níwọ́n ìgbà tí àwọn ion irin kan ní ipa ìfúnni àti ìdènà lórí ìṣiṣẹ́ enzyme, a gbọ́dọ̀ gbé ipa wọn lórí ìṣiṣẹ́ enzyme yẹ̀ wò nínú àwọn ohun èlò ilé-iṣẹ́. Èyí ṣe pàtàkì nítorí pé àwọn ion irin jẹ́ àwọn ohun ìbàjẹ́ àyíká tí ó wọ́pọ̀ tí ó lè ní ipa lórí ìdúróṣinṣin àti ìṣẹ̀dá àwọn enzyme tí ó wà ní ìta.47Láti ṣe ìwádìí lórí ipa àwọn ion irin púpọ̀ lórí laccase láti inú *Pleurotus ostreatus* NRC 620, a ṣe àwọn àyẹ̀wò tó báramu. Gẹ́gẹ́ bí a ṣe fihàn ní Àwòrán 4, ní ìbámu pẹ̀lú irú irin tí a lò, mímú kí ìṣọ̀kan ion irin pọ̀ sí i láti 2.5 mM sí 10 mM ní ipa búburú lórí iṣẹ́ enzyme. Fún àpẹẹrẹ,Iṣuwọn²⁺ , Co²⁺ , Zn²⁺, àtiCu²⁺le mu iṣẹ ṣiṣe enzymu ṣiṣẹ ati mu ṣiṣẹ, lakokoNá⁺ , Mn²⁺ , Ca²⁺, àtiK⁺le dẹkun iṣẹ-ṣiṣe enzyme naa. Ni ifọkansi 10 mM, awọn ions Cu²⁺ ati Mg²⁺ ni awọn oluṣiṣẹ agbara julọ ti iṣẹ-ṣiṣe laccase lati *Pleurotus ostreatus* NRC 620, ti o pese iwọn imuṣiṣẹ ti to 34% ati 20%, lẹsẹsẹ. Sibẹsibẹ, ni ifọkansi 10 mM, awọn ions Ca²⁺ ni o lagbara julọ ti o ṣe idiwọ laccase, ti o dinku iṣẹ-ṣiṣe enzyme nipasẹ to 60%.
Ipa ti awọn ion irin lori iṣẹ Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase. A fi laccase naa sinu apo sodium phosphate buffer fun iṣẹju mẹwa (0.05 M, pH 7.0) ti o ni awọn ion irin oriṣiriṣi ni awọn ifọkansi ti 2.5 mM ati 10 mM. Lẹhin naa a bẹrẹ iṣe naa nipasẹ afikun ti substrate (ABTS), lẹhin eyi ni a wọn iṣẹ ibatan naa.
Àwọn àbájáde wa bá ti àwọn òǹkọ̀wé mìíràn mu tí wọ́n rí i pé Mg²⁺ àti Cu²⁺ mú kí iṣẹ́ *Trametes polyzona* WRF03³ pọ̀ sí i. Castaño àti àwọn ẹlòmíràn⁴⁸ rí i pé laccase láti *Xylaria* sp. ni a ń ru sókè dé ìwọ̀n kan nípasẹ̀ àwọn ions copper (Cu²⁺). Jù bẹ́ẹ̀ lọ, Foroutanfar àti àwọn ẹlòmíràn⁴⁹ àti Si àti àwọn ẹlòmíràn ṣe àwọn ìwádìí kan náà lórí àwọn laccase láti *Paraconiothyrium variabile* àti *Trametes pubescens*, lẹ́sẹẹsẹ. A lè fi Cu²⁺ kún ibi tí a ti ń so copper-binding site (T2) enzyme yìí ní ìṣọ̀kan kan, èyí tí ó lè ṣàlàyé ìfúnni ní ìṣiṣẹ́ laccase ní ìṣọ̀kan Cu²⁺³⁹ tí ó ga jùlọ. Níwọ́n ìgbà tí àwọn ààrùn funfun rot ti jẹ́ oxidases tí ó ní ọ̀pọ̀lọpọ̀ àwọn átọ̀mù bàbà, àwọn ipa ti àwọn ion bàbà lórí ìṣiṣẹ́ laccase jẹ́ onírúurú àti láti ìfúnni níṣìírí àti ìdènà sí àìdádúró.⁵¹ Ní ìyàtọ̀ sí èyí, Zhou àti àwọn ẹlòmíràn. [52]royin peCu²⁺ṣe ìdíwọ́ fún ìgbòkègbodò laccase ti àwọn termite abẹ́ ilẹ̀ Taiwan (Odontotermes formosanus). Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn laccase ti Cerena sp. HYB07[53]àti Clitocybe maxima[54]àwọn ion bàbà kò ní ipa lórí wọn.
A fi àwọn èròjà kinetic pàrámítà rẹ̀ (Km àti Vmax) ṣe àfihàn ìpele pàtó ti substrate náà; bí ìsopọ̀ ìsopọ̀ ti substrate náà bá enzyme náà mu tó, bẹ́ẹ̀ ni iye Km náà ṣe ń dínkù, tí ìpele pàtó ti substrate náà sì ń pọ̀ sí i.3,21,55A pinnu awọn pàrámítà kinetic (Km àti Vmax) ti laccase lati inu *Pleurotus ostreatus* NRC 620 nipa lilo sọfitiwia GraphPad Prism 6.0 nipa fifi apẹrẹ Lineweaver-Burk han (Àwòrán 5). Nigbati a ba n lo ABTS gẹgẹbi substrate, awọn abajade jẹ 1.99 mM ati 16217 μmolìṣẹ́jú díẹ̀¹ L⁻¹,lẹ́sẹẹsẹ. Elsayed àti àwọn ẹlòmíràn.21ròyìn pé àwọn iye Km fún ìfàsẹ́yìn ABTS jẹ́ 0.1 mM àti 0.064 mM, lẹ́sẹẹsẹ, èyí tí ó fi hàn pé àwọn isoenzymes Lac A àti Lac B ní ìsopọ̀ gíga fún ABTS. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, àwọn iye Vmax jẹ́ 0.182 μmolìṣẹ́jú díẹ̀¹àti 0.603 μmolìṣẹ́jú díẹ̀¹, lẹ́sẹẹsẹ. Iye Km tí a rí kéré sí ti Trametes polyzona WRF03 (8.66 mM); pẹ̀lúpẹ̀lú, iye Vmax wọn (1429 mmol min⁻¹) náà jẹ́isalẹNígbà tí a bá ń lo ABTS gẹ́gẹ́ bí ohun èlò ìṣàpẹẹrẹ.33 Bákan náà, àwọn ìwọ̀n Km ti Lentinus squarrosulus MR13 àti Trametes sp. AH28-2 laccase jẹ́ 0.0714 mM àti 0.025 mM, lẹ́sẹẹsẹ, àwọn ìwọ̀n Vmax sì jẹ́ 0.0091 mM min−1 àti 0.67 mM min−1 mg−1 (ní ìbámu pẹ̀lú ABTS), lẹ́sẹẹsẹ.56,57
A ṣe ìwádìí lórí ipa ìfojúsùn ABTS lórí ìṣiṣẹ́ laccase láti inú *Pleurotus ostreatus* NRC 620, a sì ṣe àgbéyẹ̀wò àlàfo Lineweaver-Burk ti ìfọwọ́sowọ́pọ̀ ti iyara ìfọwọ́sowọ́pọ̀ àkọ́kọ́ sí ìfọwọ́sowọ́pọ̀ ABTS. A wọn ìfọwọ́sowọ́pọ̀ oxidation ti ABTS pẹ̀lú àwọn ìfọwọ́sowọ́pọ̀ ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ (0.025–3.0 mM) ti laccase ní pH 4.5 láti pinnu àwọn pàrámítà kinetic (Vmax àti Km). A ṣe ìṣirò àwọn ìfọwọ́sowọ́pọ̀ kinetic Michaelis-Menten nípa lílo àlàfo Lineweaver-Burk ti ìfọwọ́sowọ́pọ̀ ti iyara ìfọwọ́sowọ́pọ̀ sí ìfọwọ́sowọ́pọ̀ substrate. A ṣe ìṣirò àwọn ìfọwọ́sowọ́pọ̀ kinetic láti inú àlàfo Lineweaver-Burk nípa lílo sọ́fítíwọ́ọ̀tì GraphPad Prism 6.01.
Àwọn enzymu ìṣàfihàn àṣà ìbílẹ̀, bíi pectinases, hydrolyze pectic substances, dín ìfọ́ àti ìfọ́ kù. Wọ́n ń fọ́ àwọn polysaccharides ìṣètò ní ọ̀nà tó dára, wọ́n sì sábà máa ń lò wọ́n pẹ̀lú àwọn enzymu mìíràn, bíi cellulases àti hemicellulases, láti mú kí ìṣẹ̀dá àti ìmọ́lẹ̀ sunwọ̀n sí i. Síbẹ̀síbẹ̀, pectinases kò fojú sí àwọn èròjà phenolic pàtó, èyí tí ó jẹ́ olùrànlọ́wọ́ pàtàkì sí ìfọ́ àti ìfọ́ oxidative browning, pàápàá jùlọ nínú àwọn oje bíi apple àti grapefruit oje.58Ní ìyàtọ̀ sí èyí, àwọn laccas máa ń mú kí ìfọ́sídì àwọn àdàpọ̀ phenolic pọ̀ sí i, wọ́n sì máa ń sọ wọ́n di àwọn molecule tó tóbi, tí kò lè yọ́ tí a lè yọ kúrò nípasẹ̀ ìfọ́sídì tàbí ìfọ́sídì. Kì í ṣe pé ìlànà yìí máa ń mú kí ìmọ́lẹ̀ sunwọ̀n sí i nìkan ni, ó tún máa ń mú kí omi náà pẹ́ sí i nípa dídín àǹfààní ìfọ́sídìdì tí àwọn àdàpọ̀ phenolic máa ń fà kù. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, a lè ṣe àwọn ìlànà ìfọ́sídìdì tí a dá lórí laccase lábẹ́ àwọn ipò ìṣiṣẹ́ díẹ̀ (pH 3.5–5.5, iwọ̀n otútù 25–40 °C), èyí sì máa ń mú kí wọ́n dára fún àwọn oje onírẹ̀lẹ̀ láìsí pé wọ́n ní àwọn ànímọ́ oúnjẹ tàbí organoleptic.59Àwọn ìwádìí ti fihàn pé ìtọ́jú pectinase lè mú omi jáde láàrín wákàtí kan sí méjì, nígbàtí ìtọ́jú laccase sábà máa ń gba àkókò ìṣesí tó gùn jù (wákàtí 3–6) láti dín àwọn èròjà phenolic kù pátápátá. Síbẹ̀síbẹ̀, a lè ṣe àtúnṣe ìlànà yìí nípa dídín enzyme náà tàbí nípa sísopọ̀ laccase pọ̀ mọ́ àwọn ọ̀nà ìṣàfihàn ẹ̀rọ.60Nínú ìwádìí yìí, ìṣàfihàn enzyme ti ìyọkúrò èéfín fi hàn pé iṣẹ́ laccase àti α-amylase ṣe pàtàkì, nígbàtí iṣẹ́ pectinase àti xylanase kéré gan-an, a kò sì rí iṣẹ́ cellulase. Nítorí náà, ìdínkù nínú ìdàrúdàpọ̀ àti ìwọ̀n phenolic jẹ́ nítorí iṣẹ́ laccase, nígbàtí ìyípadà nínú ìfàsẹ́yìn lè jẹ́ nítorí iṣẹ́ amylase.
Táblì 1 fi àwọn ìlànà ìṣiṣẹ́ ara hàn ti omi ápù tí a ṣẹ̀ṣẹ̀ fún àti àwọn àpẹẹrẹ tí a ti tọ́jú láccase. Àwọn èsì náà fihàn pé èso omi ápù tí a ṣẹ̀ṣẹ̀ fún (71.59%) kéré sí ti àwọn àpẹẹrẹ tí a ti tọ́jú láccase (87.34%). Àwọn èsì wọ̀nyí bá àwọn àbájáde Pilnik àti Orange mu.61, ẹni tó fihàn pé lílo àwọn enzymu nínú ṣíṣe èso lè mú kí omi inú rẹ̀ pọ̀ sí i, kí ó mú kí ó sunwọ̀n sí i, kí ó sì rí omi tó mọ́ tónítóní tó dára jù fún ìdàgbàsókè. Ìbísí nínú omi inú rẹ̀ jẹ́ nítorí àfikún nínú àkóónú àwọn súgà tó ń yọ́ nínú omi inú rẹ̀. Nígbà tí èso bá ń yí padà sí enzyme hydrolysis, mesoglea àti pectin nínú àwọn ògiri sẹ́ẹ̀lì ti ọjà náà ni a máa parun tí a sì máa yípadà sí àwọn ohun tó ń yọ́ bíi súgà àti ásíìdì tí kò ní ìṣọ̀kan.62.Iye pH ti omi apple ti a fi enzyme ṣe itọju kere pupọ ju ti ẹgbẹ iṣakoso lọ (P < 0.05), ati iye pH ti awọn ẹgbẹ mejeeji pọ si ni pataki lakoko ipamọ (Tabili 1). Awọn abajade wọnyi baamu pẹlu ti Mark et al.63, ẹni tí ó kíyèsí pé pH omi èso cashew dínkù lẹ́yìn ìtọ́jú lẹ́yìn ìtọ́jú ooru. Ìbàjẹ́ pectin àti ìṣẹ̀dá galacturonic acid lẹ́yìn ìtọ́jú enzyme lè jẹ́ ohun tí ó fa ìbísí pH nígbà ìtọ́jú. pH ti àwọn àpẹẹrẹ tí a fi enzyme tọ́jú wà láàrín 4.05 àti 4.31 ní gbogbo ìtọ́jú, nígbà tí pH omi ápù tí a kò tí ìtọ́jú wà láàrín 4.12 àti 4.33.
Àròpọ̀ àsìdì (TA) ti àwọn àyẹ̀wò tí a kò tọ́jú àti èyí tí a fi laccase tọ́jú fi hàn pé ó ń dínkù pẹ̀lú àkókò ìfipamọ́ tí ń pọ̀ sí i (Táblì 1). Ìdínkù nínú àsìdì ni a fi ṣe àyípadà àwọn àsìdì organic sí àwọn carbohydrate tàbí àwọn ìṣesí enzymatic, àti ìfàsẹ́yìn nígbà ìfipamọ́ oje.64Àròpọ̀ adídùn omi apple tí a ṣàkóso àti àwọn àyẹ̀wò tí a fi enzyme ṣe kò tó ti àwọn oje mìíràn (oje sitróbẹ́rì 0.9%, oje plum 2.2%, oje kumquat 1.0%, oje apricot 2.4%, oje osan 0.8%), ṣùgbọ́n ó jọ ti àwọn oje mìíràn (fún àpẹẹrẹ, oje pear 0.3%).62Àwọn ìyàtọ̀ wọ̀nyí nínú omi ápù tí a ti fún ní ìfúnpọ̀ tí kò tí ì tọ́jú lè jẹ́ nítorí onírúurú nǹkan bí ipò ìdàgbàsókè, àwọn ohun tí ó ń fa ìbílẹ̀, ìpele ìdàgbàsókè, àti àwọn ọ̀nà ìtọ́jú.65Dídínkù nínú gbogbo acidity ti iṣakoso ati omi apple ti a fi laccase ṣe ni ibamu pẹlu awọn abajade ti Singh et al gbekalẹ.66nípa ìdínkù nínú àdínkù nínú gbogbo àdínkù nínú omi ápù Jin Nuo lẹ́yìn ọjọ́ mẹ́rìnléláàádọ́rin tí a ti fi pamọ́. Ní ọwọ́ kejì ẹ̀wẹ̀, Oshmiansky àti Wojdylo67Kò rí ìyípadà pàtàkì kankan nínú adídùn omi ápù nígbà tí a ń kẹ́kọ̀ọ́ nípa ipa àwọn ọ̀nà ìṣàlàyé ìbílẹ̀.
Àwọn èsì tí a gbé kalẹ̀ nínú Táblì 1 fihàn pé iye gbogbo ohun tí ó lè tú jáde (TSS) ti omi ápù tí a fi laccase tọ́jú ga ju ti àyẹ̀wò tí a kò tọ́jú lọ. Àwọn èsì wọ̀nyí bá àwọn ìwádìí tí a tẹ̀ jáde mu.. 68Síwájú sí i, Táblì 1 fihàn pé iye TSS ti ẹgbẹ́ omi apù ìṣàkóso jẹ́ 9.58 ní àkókò ìbẹ̀rẹ̀ ó sì dé 11.05 ní òpin àkókò ìfipamọ́ náà. Àwọn iye wọ̀nyí kéré sí iye TSS ti omi apù tuntun tí Hamid et al. ròyìn.. 69(11.2 àti 11.80, lẹ́sẹẹsẹ). Iye TSS ti awọn ayẹwo omi apple ti a fi laccase ṣe mu pọ si ni pataki, bẹrẹ lati 11.23 ati de 12.93 lẹhin ọsẹ meji ti ipamọ ni 4°C (Tabili 1). Iru ilosoke kanna ni TSS lakoko ipamọ ni a tun ṣe akiyesi ninu awọn eso osan, lẹmọọn, ati awọn osan didùn. Ilọsi ninu awọn solids ti o le ṣofo lapapọ (TSS) lakoko ipamọ le jẹ nitori hydrolysis ti awọn polysaccharides (sitashi) si awọn monosaccharides (suga), ilosoke ninu ifọkansi nitori gbigbẹ omi, ati ibajẹ pectin ninu omi si awọn solids ti o le ṣofo. Ilọsi ninu awọn solids ti o le ṣofo lapapọ (TSS) ṣee ṣe nitori ilosoke ninu awọn suga ti o le ṣofo, eyiti o le ṣe nipasẹ iyipada pectin tabi cellulose si awọn suga ti o le ṣofo nipasẹ pectin tabi cellulose, lẹsẹsẹ, tabi nipasẹ hydrolysis ti sitashi si awọn suga, gẹgẹbi Hamed et al. ṣe royin.69.A le rii ipa ti laccase lori awọn abuda ti omi apple, bi omi apple ti a ti tọju laccase ṣe afihan sisan ti o dara julọ ati idinku viscosity ju omi ti a ko tọju lọ. A ṣe akiyesi yii ni Tabili 1; viscosity ti ayẹwo ti a ti tọju enzyme jẹ 1.87 cP, lakoko ti viscosity ti ayẹwo iṣakoso jẹ 2.95 cP. Idinku pataki yii ninu viscosity jẹ nitori agbara mimu omi ti o ga julọ ti awọn nkan ti o dabi pectin ati dida eto nẹtiwọọki ti o papọ.
Nínú ìwádìí yìí, a ṣe ìwádìí ipa ti laccase lórí àtọ́ka browning (BI) ti omi apple nípa lílo spectrophotometer láti wọn ìfàmọ́ra ní 420 nm. Àwọn èsì náà ni a fihàn nínú Táblì 1. Nígbà ìfipamọ́, BI ti àwọn àpẹẹrẹ omi apple nínú àwọn ẹgbẹ́ tí a tọ́jú àti àwọn tí a kò tọ́jú fi ìtẹ̀síwájú hàn ní dídíẹ̀. BI ṣe àfihàn ìwọ̀n browning ó sì lè ṣiṣẹ́ gẹ́gẹ́ bípataki kanàmì ìfàmọ́ra àwọn ìṣesí enzyme àti àwọn ìṣesí tí kìí ṣe enzymatic. Ìfàmọ́ra náà pọ̀ sí i ní pàtàkì nígbà ìfipamọ́ (P < 0.05). Ní ìparí ìfipamọ́,A420Iye awọn ayẹwo omi eso apple ninu awọn ẹgbẹ iṣakoso ati awọn ti a tọju enzyme pọ si ni ayika 217% ati 121%, lẹsẹsẹ (Tabili 1). Awọn abajade fihan pe itọju enzyme le dinku iwọn browning daradara ni bii 56%. Awọn abajade Bezerra et al.[19]] bá àwọn àbájáde wa mu; Wọ́n lo okun laccase-glutaraldehyde-agbon láti mú kí omi ápù mọ́ kedere, èyí sì dín àwọ̀ àtilẹ̀wá rẹ̀ kù ní 61%.
Bó tilẹ̀ jẹ́ pé àwọn polyphenols tó wà nínú omi èso ní ipa rere lórí oúnjẹ àti ìtọ́jú ara ènìyàn, wọ́n tún lè ṣe pẹ̀lú àwọn protein, èyí tó lè fa ìkùukùu omi, ìdọ̀tí, tàbí ìdàrúdàpọ̀, èyí tó lè yí adùn àti òórùn ọjà náà padà, tó sì lè dín àkókò tí ó fi wà ní ìpamọ́ kù.71Ète ìwádìí yìí ni láti dín iye phenolic compound tí ó wà nínú omi apple kù láìléwu nípa lílo laccase láti inú Pleurotus ostreatus NRC 620. Àwọn èsì tí a gbé kalẹ̀ nínú Táblì 1 fihàn pé iye phenolic compound tí ó wà nínú omi apple tí a fi laccase tọ́jú dínkù gidigidi kí a tó tọ́jú rẹ̀ ní 4°C. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, iye phenolic compound tí ó wà nínú rẹ̀ tún dínkù nígbà tí a ń tọ́jú rẹ̀ nínú àwọn àpẹẹrẹ méjèèjì tí a kẹ́kọ̀ọ́ (Táblì 1). Ìwádìí láti ọwọ́ Sandri àti àwọn ẹlẹgbẹ́ rẹ̀.72fihàn pé omi ápù tí a fi enzyme ṣe lè pa iṣẹ́ antioxidant rẹ̀ mọ́ àti àkópọ̀ phenolic. Síbẹ̀síbẹ̀, àwọn àbájáde ìwádìí kan láti ọwọ́ Lettera et al.73fihàn pé ìtọ́jú omi osan pẹ̀lú laccase olu le dín iye àwọn èròjà phenolic nínú rẹ̀ kù sí 45%.
A ti fihan pe awọn agbo-ara phenolic ni awọn agbara bii scavenging free radical, idinku ati pipa atẹgun singlet, gbigbe hydrogen atom, ati ifunni elekitironi si awọn free radicals, ti o sọ wọn di awọn antioxidants ti o lagbara.74Nítorí náà, nínú ìwádìí yìí, a lo àwọn ọ̀nà DPPH àti FRAP láti ṣe àyẹ̀wò ipa ti laccase lórí ìṣiṣẹ́ antioxidant ti omi apple tí a tọ́jú sínú fìríìjì fún ọjọ́ mẹ́rìnlá (Tábìlì 2). Àwọn ọ̀nà méjèèjì fi ìbísí nínú ìṣiṣẹ́ antioxidant hàn nígbà ìtọ́jú, èyí tí ó lè jẹ́ nítorí ìbísí nínú àwọn èròjà free phenolic tàbí ìṣẹ̀dá àwọn ọjà reaction Maillard (MRPs), pẹ̀lú àwọn ọjà reaction Maillard tí ó ṣeé ṣe kí ó jẹ́ okùnfà ìbísí nínú ìṣiṣẹ́ antioxidant.75Àwọn ìṣesí browning tí kìí ṣe enzymatic (pẹ̀lú ìbàjẹ́ ascorbic acid, àwọn ìṣesí Maillard, àti ìbàjẹ́ acid-catalyzed of sugars) ń mú àwọn àwọ̀ brown pigments jáde (melanoidins). Àwọn ọjà ìbàjẹ́ ascorbic acid àárín àti àwọn ọjà ìbàjẹ́ suga (bíi àwọn èròjà carbonyl) lè ṣe àtúnṣe pẹ̀lú àwọn amino acids nípasẹ̀ àwọn ìṣesí Maillard.76Bó tilẹ̀ jẹ́ pé a ti ṣe àyẹ̀wò púpọ̀ nípa bí a ṣe ń fi èso àti ewébẹ̀ ṣe àwọ̀ ilẹ̀ nígbà tí a bá ń tọ́jú wọn, òye wa nípa àwọn ìṣesí wọ̀nyí kò tíì pọ̀ tó.77Ní ìfiwéra pẹ̀lú ọ̀nà FRAP, omi apple tí a fi laccase tọ́jú fi hàn pé agbára antioxidant dínkù gidigidi nípa ọ̀nà DPPH (Táblì 2), àti pé agbára antioxidant ti gbogbo àwọn àpẹẹrẹ pọ̀ sí i ní pàtàkì pẹ̀lú àkókò ìfipamọ́ tí ó ń pọ̀ sí i. Ọ̀nà méjì ọ̀tọ̀ọ̀tọ̀ láti pinnu iṣẹ́ antioxidant ni a lò nínú ìwádìí yìí nítorí pé àwọn ìlànà wọn yàtọ̀ síra. Ọ̀nà DPPH ń wọn agbára láti dín agbára free radicals kù, nígbà tí ọ̀nà FRAP ń wọn agbára láti dín iron ions kù. Nítorí náà, a gbani nímọ̀ràn láti lo ọ̀pọ̀lọpọ̀ ọ̀nà láti pinnu iṣẹ́ antioxidant láti lóye iṣẹ́ antioxidant ti àwọn àpẹẹrẹ tí a kẹ́kọ̀ọ́.78
Ọ̀kan lára àwọn àwárí pàtàkì nínú ìwádìí yìí ni pé *Pleurotus ostreatus* laccase NRC 620 ní agbára tó dára jùlọ ní 70°C àti pH 3.0. Ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn laccase olu mìíràn tí a sábà máa ń lò fún ṣíṣe àlàyé omi, bíi *Trametes versicolor* àti *Ganoderma lucidum* laccase, *P. ostreatus* NRC 620 ní ìdúróṣinṣin ooru tó ga jù àti pH tó ní ekikan. Àwọn laccase láti *Trametes versicolor* àti *Ganoderma lucidum* sábà máa ń ní agbára tó dára jùlọ ní ìwọ̀n 50-60°C àti ní ìwọ̀n pH láàrín 3.5 àti 5.0. Ìyàtọ̀ yìí lè mú kí ó dára síi láti ṣe àlàyé omi, pàápàá jùlọ fún àwọn oje acid níbi tí ìdúróṣinṣin ní ìwọ̀n pH tó kéré síi ṣe pàtàkì. Ànímọ́ àrà ọ̀tọ̀ ti *P. Ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn laccase olu mìíràn tí a kẹ́kọ̀ọ́, *Pleurotus ostreatus* NRC 620 ní agbára láti ṣiṣẹ́ dáadáa lábẹ́ àwọn ipò tó le koko jù. Iwọn otutu iṣẹ ṣiṣe ti o ga julọ rẹ fihan awọn anfani ti o ṣeeṣe ninu awọn ohun elo ile-iṣẹ, gẹgẹbi awọn oṣuwọn idahun iyara ati idinku idoti awọn kokoro arun. pH kekere rẹ, eyiti o baamu daradara si iseda ekikan ti ọpọlọpọ awọn oje, le wulo ninu awọn ilana ṣiṣe alaye oje. Awọn abajade wọnyi jẹrisi iwadii siwaju fun lilo nla, ti o jẹ ki *Pleurotus ostreatus* NRC 620 jẹ yiyan ti o wulo si awọn orisun laccase olu ibile. Ni akawe pẹlu awọn iwadi iṣaaju, a rii pe iwọn otutu ti o dara julọ jẹ 60°C ati pe pH ti o dara julọ jẹ 3.0. Lẹhin iṣe ni 60°C fun iṣẹju 80, laccase *Ganoderma lucidum* duro46% ti iṣiṣẹ rẹ.79 Gẹ́gẹ́ bí Kurniawati àti Nicelle ti sọ80, *Ganoderma lucidum* enzymes fi iduroṣinṣin to dara si dede han ni 25°C ati awọn iye pH lati 5.0 si 8.0, ati iduroṣinṣin ni pH 6.0 ati awọn iwọn otutu lati 10 si 30°C. Ninu iwadi yii, a rii pe pH ati iwọn otutu to dara julọ fun iṣẹ enzyme fun *Pleurotus ostreatus* jẹ 3.0 ati 70°C, lẹsẹsẹ. Lẹhin incubation ni 40°C ati 50°C fun wakati meji, enzyme naa pa 68.33% ati 59.61% ti iṣẹ rẹ mọ, lẹsẹsẹ. Pẹlupẹlu, Pleurotus ostreatus NRC 620 laccase fihan iṣẹ giga lori iwọn otutu jakejado lati 50°C si 80°C, o fẹrẹ de opin iṣẹ ti o pọju (69%–98%), pẹlu iṣẹ ti o pọju ti a ṣe akiyesi ni 70°C.
Ní ìparí, oyster mushroom laccase NRC620, tí a rí lábẹ́ àwọn ipò àìdúró, fi ìṣiṣẹ́ àti ìdúróṣinṣin tó dára jùlọ hàn ní gbogbo àwọn ipò pH àti ìwọ̀n otútù, èyí tí ó fi ìdúróṣinṣin tó ga jùlọ hàn ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn orísun enzyme mìíràn. Àfikún 10 mM MgSO₄ àti CuSO₄ mú kí iṣẹ́ enzyme pọ̀ sí i ní nǹkan bí 21% àti 35%, lẹ́sẹẹsẹ. Nígbà tí a bá ṣe é sínú omi ápù, enzyme náà dín pH àti viscosity kù, nígbà tí ìwọ̀n phenolic náà dínkù díẹ̀ nígbà tí a bá ń tọ́jú rẹ̀.
Àwọn àbájáde náà fìdí agbára laccase múlẹ̀ nínú ilé iṣẹ́ oúnjẹ, pàápàá jùlọ nínú ṣíṣe àtúnṣe ohun mímu. Nípa pípa àwọn èròjà phenolic run ní pàtó, laccase kìí ṣe pé ó dín ìdọ̀tí kù nìkan ni, ó sì mú kí ó mọ́ kedere, ṣùgbọ́n ó tún ń mú kí ó dára ju àwọn èso tí ó wà nínú rẹ̀ lábẹ́ àwọn ipò ìṣiṣẹ́ díẹ̀. Láìdàbí àwọn ohun èlò ìṣàfihàn àṣà ìbílẹ̀ bíi gelatin, bentonite, àti silica gel, laccase kìí mú ìdọ̀tí jáde tàbí mú òórùn dídùn kúrò nínú ohun mímu, èyí tí ó mú kí ó jẹ́ àṣàyàn tí ó dára fún àyíká àti tí ó lè pẹ́ títí. Jù bẹ́ẹ̀ lọ, ní ìfiwéra pẹ̀lú àwọn enzymes àti àwọn ọ̀nà ìṣàyẹ̀wò mìíràn, laccase ní ojútùú tí a fojú sí tí ó sì ń ná owó láìsí ìpalára dídára ọjà.
Kyomuhimbo, HD ati Brink, HG. Awọn ilana lilo ati idaduro ti awọn laccase ti o ni idẹ; atunyẹwo kan. Heliyon 9, e13156 (2023).
Àkókò ìfìwéránṣẹ́: Oṣù Kejìlá-15-2025